首款“数字PCR cfDNA 甲基化肝癌”试剂盒
目前已经获批的10余款甲基化检测产品基本都是使用荧光PCR进行检测,采用数字PCR的这是第一款,从数字PCR的高灵敏的优势来看,这也意味着其检测的样本类型会更加的普适、易获得。
从公开信息得知,这款产品的预期用途为:用于体外定性检测人血清中游离DNA(cfDNA)中的BMPR1A和PLAC8基因甲基化水平。
(相关资料图)
肝癌筛查方法
目前肝癌筛查方式主要包括血液学AFP(甲胎蛋白)检测和影像学检查。从目前诊疗路径来看,肝癌早筛通常联合AFP和肝脏超声(US)对肝癌高危人群进行定期筛查,发现异常再进一步考虑CT或者核磁共振检查。
· 甲胎蛋白(AFP)是目前诊断肝癌应用最多的血清学标志物,但仍有近40%肝癌患者AFP持续在正常或较低水平,而且妊娠、活动性肝炎、生殖系统肿瘤、胃肠胰腺等其他消化道肿瘤等人群血清AFP也会升高。
· 虽然超声(US)设备简单,价格低容易开展,在临床上广泛应用,但其对早期肝癌诊断灵敏度仅47%,且受肝硬化结节干扰,对操作者经验要求较高。即使联合应用AFP和超声检测,对早期肝癌的灵敏度也仅有63%,仍然无法满足早期肝癌筛查的需求。
· CT平扫对于极早期肝癌(<1 cm)或密度近似正常肝实质的肝癌难以显示,且具有一定的放射性。
· MRI虽然性能较超声(US)和CT较大提升,但检测的灵敏度和特异性也存在一定的天花板。我国人口基数大、经济水平不足,将其作为常规筛查手段也不大现实。
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指南共识
当前,我国已有多部指南/共识将基因甲基化推荐用于肝癌早期筛查和诊断。其中,国家癌症中心赫捷院士和陈万青教授最新发表的《中国人群肝癌筛查指南(2022,北京)》认为,体循环中新型标志物的液体活检手段与血清AFP比较也体现出更高的灵敏度和特异度,包括微小核糖核酸和循环肿瘤DNA等。这些证明有良好筛查价值的血清或ctDNA可作为补充筛查技术,但尚不能完全替代血清AFP检测。2021年由王红阳院士牵头撰写的《中国肝癌早筛策略专家共识》明确指出cfDNA表观遗传性修饰检测有一定的应用潜力,可以作为个体化诊断的补充。同年,由中华医学会肝病学分会发布的《原发性肝癌二级预防共识》中提到,有多种处于探索阶段的新型血清学分子标志物,其中包括循环肿瘤DNA甲基化等,在诊断肝细胞癌上有其特定的优势。
数字PCR+甲基化
DNA甲基化的改变多发生于癌症早期,在某些特定癌症中,检测特异的甲基化标志物有助于癌症的早期发现,进而大大提高癌症患者的生存率。
微液滴数字PCR (ddPCR)是近年来PCR技术的一项新进展,通过微液滴化,终点PCR和泊松分布,数字PCR无需标准曲线即可实现核酸浓度的绝对定量。与实时定量PCR技术(qPCR)对比,数字PCR具有灵敏度高,准确度高、精密度高、重复性高,对PCR抑制剂耐受度高的优势。
使用ddPCR方法进行DNA甲基化分析时,其优势能够得到进一步的发挥,在检测血浆游离DNA、FFPE DNA等多种样本来源的DNA的甲基化状态时表现优异。因此,基于ddPCR的甲基化检测技术将来有潜力应用于肿瘤甲基化标志物的检测中,辅助临床诊断和治疗,应用于肿瘤早诊和筛查领域。
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